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新型体构架糖解离萃取技艺从优研讨

发布时间:07-05  
实验方法实验设计醇沉条件优化:以影响雷蘑胞外多糖醇沉得率的3个关键因素即乙醇浓度、醇沉时间及温度为考察因子,以胞外多糖得率为评价指标,采用3因素3水平Box-Behnken统计学实验设计方法,对醇沉条件进行优化。
脱蛋白剂与样品液配比优化:以脱蛋白率DPR为评价指标,应用混合设计,确立脱蛋白剂氯仿(X1)、正丁醇(X2)和样品透析液(X3)三者之间的最佳体积配比。因子限制条件为0.2≤X1≤0.6、0.0≤X2≤0.2、0.4≤X3≤0.6,采用下列Scheffé模型方程进行回归拟合。
Y=ki=1"βiXi+"kiπjπkπ"βijXiXjSevag法脱蛋白条件优化:采用Box-Behnken实验设计,以脱蛋白次数(A1)、每次脱蛋白时间(A2)和温度(A3)为主要考察因子,以脱蛋白率DPR为评价指标。取透析液50mL置250mL三角瓶中,按照实验设计要求,计算每组试验的脱蛋白率。
统计分析所有实验数据均采用DesignExpert进行分析。胞外多糖得率测定:取透析液5mL置100mL三角瓶中,按照设计要求加入一定量的无水乙醇,到实验设计时间将其取出,5000r/min离心20min,得醇沉多糖。加5mL去离子水将醇沉多糖复溶后,另取5mL透析液,同时采用Sevag法脱蛋白至两相界面无膜出现为止,分别取2mL该脱蛋白液,用自来水、蒸馏水各透析2d后,取出透析液定容至50mL,采用文献[11]方法测定多糖含量。每组胞外多糖得率(EPGR)按下式计算,取平均值(2组重复)代入设计表。
结果与分析醇沉条件Box-Behnken实验显示了醇沉实验的因子编码及其水平范围,3个关键因子实际试验水平X1、X2和X3分别以x1、x2和x3编码之,且符合下列自变量编码方程为:xi=(Xi-X0)/△Xi(1)式中:xi为自变量的编码值;Xi为自变量的实际实验水平值;X0为实验水平中心点的实际值;△Xi为单变量增量。
设该模型通过最小二乘法拟合的二次多项方程为:EPGR/%=c0+m1X1+m2X2+m3X3+n12X1X2+n13X1X3+n23X2X3+n11X12+n22X2+n33X32(2)式中:EPGR(%)为预测响应值;xi为自变量编码值;c0为常数项;mi为线性系数;ni为二次项系数。(i表示1 ̄3)。为拟合方程(2)各项回归系数,共需完成17组实验。
脱蛋白液配比优化实验采用在混合物组成配比研究中的混合设计(Mix-turedesign)来确定脱蛋白剂氯仿和正丁醇的配比以及脱蛋白剂与处理样品之间的配比,结果。
讨论大多数真菌多糖分离提取过程基本相似,但醇沉及脱蛋白过程却各异。可知,获得雷蘑最高胞外多糖得率比其他真菌所需的乙醇终浓度要高。王卫国等[12]报道,香菇多糖醇沉的最佳乙醇终浓度在70%左右,于宙等[13]认为,醇沉金针菇多糖以60% ̄70%的乙醇终浓度为最佳,吴克等[14]也认为,此浓度对醇沉猴头菇子实体多糖也最好,李永泉等[15]在分离纯化白阿魏菇菌丝体多糖时发现,当乙醇浓度在70% ̄80%时沉淀最多,该沉淀经苯酚-硫酸法检测,为多糖沉淀。推测乙醇终浓度在70% ̄80%时,有利于多糖的沉淀,但也有报道认为提取姬松茸子实体多糖的最佳乙醇浓度为80%[16]。
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