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用脂料法解离萃取类新型杆菌抗细菌活化物料

发布时间:06-23  
抗菌物质效价的生物测定在上述培养基中加入15%琼脂作为生物测定培养基。取发酵12h的大肠杆菌发酵液3mL,加到100mL冷却至55的生物测定培养基中,混合均匀,用量筒量取10mL混合液,倒入灭菌培养皿中制成平板。生物测定时,用直径为5mm的打孔器打孔,取一定稀释倍数的待测液20L加入孔中,28恒温培养18h观察抑菌圈形成情况。以刚刚形成抑菌圈的稀释倍数(简称最大有效稀释倍数)为标准,计算待测液的相对效价。效价测定过程中,尽管高浓度的解吸剂(HCl、NaOH、丙酮、乙醇)对指示菌有杀灭作用,但因指示菌对活性物质比较敏感,效价测定时需将解吸液稀释几百倍。试验证明本试验1所用解吸剂经相应稀释后,对指示菌不具抑杀作用,因此,效价测定时,不需对解吸液进行中和或蒸发处理,可直接稀释测定。
待测液抗菌物质效价的计算方法:假设待测液最大有效稀释倍数为N,此稀释倍数下抗菌物质的质量浓度为(g/mL),则:待测液抗菌物质的效价=N(g/mL)。
树脂的吸附率和解吸率的计算方法:假设发酵液的最大有效稀释倍数为N1,发酵液经树脂吸附后的最大有效稀释倍数为N2,解吸液的最大有效稀释倍数为N3,发酵液的体积为V1,收集的解吸液的体积为V2,则:吸附率=<(N1V1-N2V1)/N1V1100%=<(N1-N2)/N1100%;解吸率=100%=100%.
各种树脂吸附性能的比较取处理好的树脂各4g,分别加入120mL多粘类芽孢杆菌CpS316发酵液,置于摇床振荡吸附4h后,取上清液稀释一定倍数进行生物测定,以未被树脂吸附的发酵液为对照,比较各种树脂的吸附性能。每个处理2个重复。
各种树脂解吸性能的比较对14筛选出的吸附性能优良的树脂,各加入8mL75%的丙酮和75%的乙醇作为解吸剂,置于摇床振荡解吸1h.取解吸液稀释适当倍数做生物测定,比较各种树脂的解吸性能,筛选吸附和解吸性能优良的树脂。每个处理2个重复。
X5树脂吸解剂的筛选酸碱对解吸效果的影响分别以05mol/LHCl、05mol/LHCl50%丙酮、05mol/LHCl75%丙酮、05mol/LNaOH、05mol/LNaOH50%丙酮、05mol/LNaOH75%丙酮各8mL为解吸剂,对吸附后的树脂解吸。进行解吸液的生物测定后,计算解吸率,比较各解吸剂的解吸效果。每个处理2个重复。树脂的吸附和解吸同方法14、15.
HCl浓度对解吸效果的影响以HCl浓度为001、002、004、006、008、01、05mol/L的75%丙酮各8mL为解吸剂,分别对吸附后的树脂解吸。对解吸液做生物测定,计算解吸率,比较各解吸剂的解吸效果。每个处理2个重复。树脂的吸附和解吸同方法14、15.
X5树脂吸附量的测定取处理好的X5树脂5份,每份2g,分别加入40、60、80、100、120mL发酵液,振荡吸附4h,残液做生物测定,绘制吸附曲线,计算树脂的吸附量。每个处理2个重复。
结果与分析各种树脂的吸附性能比较发酵液经各种树脂吸附以后,收集残液,稀释适当的倍数进行生物测定,经计算,各种树脂对活性物质吸附效果如。可以看出,两类树脂皆可以吸附活性物质,4种吸附树脂的吸附效果好于3种离子交换树脂,其中,吸附树脂X5、D4020、AB8对活性物质的吸附率均在775%以上,而吸附率低于75%的树脂一般不能用于工业化生产。因此,选择前3种树脂继续考察其解吸性能。
16菌株及其抗菌物质对家蚕生长发育无不良影响,抗菌谱广,菌株的发酵性状好、抗菌物质稳定且效价高。从本试验结果看,抗细菌活性物质的提取比较容易,具有一定开发应用价值。本实验室对CpS316抗细菌活性物质的组分及结构的研究,已取得阶段性成果,初步研究表明,该活性物质为至少由5个活性组分组成的环肽类抗菌物质。
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