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胆类病细菌的分离以及治疗药物选择

发布时间:08-18  
1材料与方法1.?1试验材料培养基:普通琼脂、普通肉汤、伊红美蓝、麦康凯、三糖铁琼脂斜面、远藤氏培养基均按常规方法配制。
试验药物:单味中药和复方中药,延边大学农学院药理实验室提供。
仪器:立式高压蒸气灭菌器、显微镜、电炉、干燥箱、冰箱、超净工作台、恒温培养箱。
1.?2试验方法1.?2.?1熊胆汁中细菌的分离鉴定病料采集及细菌培养:取患有胆囊炎的熊胆汁装于编号的灭菌试管中,用接种环分别取不同编号的熊胆汁于普通琼脂培养基上划线培养,于37恒温箱中培养24?h,观察菌落生长情况、形态和颜色。之后挑取单个菌落接种于伊红美蓝、麦康凯、远藤氏、三糖铁琼脂斜面培养基,于37恒温箱进行培养,观察菌落生长情况、形态和颜色。
生化鉴定:从培养基上挑取单个菌落接种于肠杆菌科11E编码鉴定管中,37恒温箱培养48?h.
1.?2.?2抗菌中药的筛选菌悬液的制备:将0.?048?mol/L(1.?175%)氯化钡0.?5?mL加0.?18?mol/L(1%)硫酸溶液99.?5?mL,混匀后用530?nm波长比色调整其浊度,使吸收值为0.?1.该浊度为0.?5麦氏比浊标准,相当于5(10?7?10?8)CFU?/mL.将试验用的菌株接种于LB培养基,再将其放入37恒温箱中培养18?h,用分光光度计于530?nm处测定菌液浓度,使其与麦氏比浊标准相同。
药敏试验:用微量移液器吸取菌悬液0.?2?mL于普通琼脂培养基上,用无菌玻棒涂布均匀,置室温干燥30?m?in,待平皿稍干后用无菌镊子将药敏纸片以一定间隔贴在平板培养基表面,37培养24?h,然后测定各种药物的抑菌圈直径,根据抑菌圈直径大小评定细菌对各种药物的敏感性。
2结果2.?1熊胆汁中细菌的分离鉴定2.?1.?1细菌培养结果将取自患有胆囊炎熊的胆汁直接接种于普通琼脂培养基,可看到许多菌落形成,菌落呈圆形、隆起、光滑、湿润、半透明。挑取单菌落接种于伊红美蓝琼脂培养基上形成黑色、带金属光泽的菌落;挑取单菌落接种于麦康凯培养基上形成光滑、圆形的粉红色小菌落;挑取单菌落接种于远藤氏培养基上形成红色菌落;当细菌在三糖铁斜面上生长时,斜面及高层均变为黄色并产生少量气体。挑取上述各鉴别培养基上的单个菌落进行革兰染色、镜检,均呈中等大小的红色小杆菌,据此结果初步鉴定此菌为大肠杆菌。
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